發布日期:2022-05-30 點擊率:68
PCR儀是利用升溫使DNA變性,用限制性內切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的。
PCR的分類
根據DNA擴增的目的和檢測的標準可以將PCR儀分為:普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。
1、普通PCR儀
一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀,也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。普通PCR儀主要應用于科研、教學、臨床醫學、檢驗、檢疫等。
2、梯度PCR儀
一次性PCR擴增可設置一系列不同的退火溫度條件的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。
梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節約時間,也節約成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用,多應用于科研、教學機構,檢驗、檢疫等。
3、原位PCR儀
原位PCR是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增。不但可以檢測到靶DNA,而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中,更有利于探討靶DNA與細胞之間的關系。
原位PCR儀主要應用于:檢測外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒感染的檢查上;觀察病原體在體內分布規律、內源性基因片段;檢測導入基因;遺傳病基因檢測。
4、實時熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設計基礎上增加熒光信號采集系統和計算機分析處理系統,形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統,得出量化的實時結果輸出。
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