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科普知識
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壓力壓差表

液相色譜柱的使用方法

發(fā)布日期:2022-04-26 點(diǎn)擊率:41

 色譜柱使用前,最好進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是最佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。

  1、樣品的前處理:

  a、最好使用流動相溶解樣品。

  b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

  2、流動相的配制:

  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點(diǎn):

  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。

  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

  d、流動相的物化性質(zhì)要與使用檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

  e、流動相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

  f、在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

  3、流動相流速的選擇:

  因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。

  當(dāng)選用最佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

 

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